Совершенствование иммунопрофилактики гриппа и болезни Ньюкасла у птиц с применением инактивированных вакцин в сочетании с мирамистином 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология



Скачать 304.25 Kb.
страница1/3
Дата21.06.2013
Размер304.25 Kb.
ТипАвтореферат
  1   2   3


На правах рукописи


ПРИБЫТКОВА КСЕНИЯ ВАСИЛЬЕВНА

Совершенствование иммунопрофилактики гриппа и болезни Ньюкасла у птиц с применением инактивированных вакцин в сочетании с мирамистином


06.02.02 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология.

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата ветеринарных наук

Воронеж - 2011

Работа выполнена в ФГОУ ВПО "Воронежский государственный аграрный университет имени К.Д. Глинки "


Научный руководитель -

доктор ветеринарных наук, профессор

Кузьмин Геннадий Николаевич


Официальные оппоненты -

доктор ветеринарных наук

Скворцов Владимир Николаевич
доктор ветеринарных наук

Масьянов Юрий Николаевич

Ведущая организация -

ФГОУ ВПО "Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И.Скрябина"

Защита состоится «___» сентября 2011 г. в «___» часов на заседании диссертационного совета ДМ 006.004.02 при ГНУ Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии РАСХН (394087, г. Воронеж, ул. Ломоносова, 114-б).


С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии РАСХН.

Автореферат разослан «____» августа 2011 г.


Ученый секретарь

диссертационного совета Г.Н. Близнецова
1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Среди инфекционных болезней, наносящих значительный экономический ущерб птицеводству, особое место занимают грипп птиц и болезнь Ньюкасла, из-за их высокой контагиозности.

Ведущая роль в комплексе противоэпизоотических мероприятий при инфекционных болезнях птиц принадлежит иммунопрофилактике (Лагуткин Н.А., 1989; Грошева Г.А., 2000; Бочарников А.В., 2004; Комиссаров В.Б., 2004; Куляшбекова Ш.К., 2005; Джавадов Э.Д. с соавт., 2005; Придыбайло Н.Д., 2008), однако производственные инактивированные вакцины против гриппа и болезни Ньюкасла, не всегда обеспечивают птице полноценную специфическую защиту (Мезенцев С.В., 2006; Деева А.В. с соавт., 2007; Зотова З.В., 2008; Варкентин А.В. с соавт., 2009). С целью повышения иммуногенности вакцин используются различные иммуномодуляторы (Придыбайло Н.Д., 1991; Бессарабов Б.Ф., Сушкова Н.К., 1994; Комиссаров В.Б., 2004; Алексеева С.А.
, 2008), которые вводятся в организм разными способами.

В этой связи нами велся поиск иммуномодулятора двойного действия, обладающего ассоциированной антибактериальной и иммуномодулирующей активностью на слизистые оболочки верхнего отдела респираторного тракта птицы, наиболее доступного для медикаментозных инстилляций.

В качестве такого средства был выбран мирамистин, препарат из класса катионных поверхностно-активных веществ, выпускаемый ЗАО "Инфамед" (г. Москва), широко применяемый в различных областях медицинской практики (Кривошеин Ю.С., 1985; Шатров В.А., 1992; Свистов В.В., 1998; Гришин М.Н., 2001; Агафонов А.П., 2005). В ветеринарной медицине мирамистин мало изучен (Кузьмин Г.Н. с соавт, 2006).

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы является изучение возможности использования мирамистина в качестве иммуномодулятора при иммунизации птицы инактивированными вакцинами против гриппа и болезни Ньюкасла для повышения их иммуногенности.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Установить оптимальные дозы мирамистина для разных способов введения и сроки его выведения из организма кур.

2. Определить санирующее и иммуномодулирующее действие препарата на слизистую оболочку верхнего отдела дыхательной системы птиц.

3. Изучить в сравнительном аспекте иммуногенную эффективность инактивированных вакцин против болезни Ньюкасла и гриппа птиц в сочетании с мирамистином и фоспренилом.

4. Определить влияние мирамистина на вирус болезни Ньюкасла в развивающихся куриных эмбрионах.

5. Изучить сочетанное действие мирамистина и инактивированной вакцины против гриппа у уток.

6. Рассчитать экономическую эффективность применения мирамистина при иммунизации кур.

Научная новизна. Впервые определены оптимальные дозы и способы введения мирамистина при иммунизации кур инактивированными вакцинами против гриппа и болезни Ньюкасла. Выявлено выраженное антимикробное и иммуномодулирующее действие препарата при интраназальном введении на слизистую оболочку верхнего отдела респираторного тракта птиц. Установлена эффективность мирамистина в качестве иммуномодулирующего средства при вакцинации против гриппа цыплят-бройлеров и уток, а также при иммунизации против болезни Ньюкасла кур-несушек. Показана вирулицидная активность препарата в отношении вируса болезни Ньюкасла, контаминирующего развивающиеся куриные эмбрионы. Определены сроки выведения мирамистина из организма птиц.

Научная новизна исследований подтверждена получением в соавторстве патента на изобретение № 2408370 «Способ вакцинации птицы против гриппа» заявл. 17.04.2009 г; опубл. 10.01 2011 г.

Практическая значимость работы. Результаты исследований позволяют рекомендовать для широкого практического применения мирамистин в качестве иммуномодулятора при иммунизации птиц инактивированными вакцинами против гриппа и болезни Ньюкасла.

Данные, полученные при выполнении диссертационной работы, используются в учебном процессе на кафедре эпизоотологии и вирусологии ФГОУ ВПО Воронежского ГАУ им К.Д. Глинки.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены, обсуждены и получили положительную оценку на ежегодных отчетных ученых советах факультета ветеринарной медицины Воронежского ГАУ им. К.Д. Глинки 2006-2009 годов; научных конференциях профессорско-преподавательского состава ФВМ ВГАУ им. К.Д. Глинки 2007-2009 гг; межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых «Достижения молодых ученых – будущее в развитии АПК» (Воронеж, 2007); межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых «Инновационные технологии и технические средства для АПК» (Воронеж, 2009).

Основные положения, выносимые на защиту диссертации:

— влияние различных доз и способов сочетанного применения мирамистина и инактивированных вакцин против гриппа и болезни Ньюкасла на иммунный ответ птиц;

— определение сроков выведения мирамистина из организма кур;

— влияние мирамистина на показатели естественной резистентности верхнего отдела респираторного тракта кур;

— сравнительная иммуногенная эффективность инактивированных вакцин против гриппа и болезни Ньюкасла - в сочетании с мирамистином и фоспренилом;

— вирулицидная активность мирамистина в отношении вируса болезни Ньюкасла;

— сравнительное действие применения мирамистина и фоспренила на фоне иммунизации уток против гриппа.

Публикация результатов исследований. Основные положения работы изложены в 5 опубликованных научных работах, в том числе 2 в журналах рекомендованных ВАК РФ, получен 1 патент на изобретение.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 147 страницах компьютерного текста, включает 16 таблиц, 7 рисунков и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов, практических предложений. Список литературы включает 217 наименований, в том числе 162 работ отечественных и 55 – иностранных авторов. В приложении представлены документы, подтверждающие достоверность результатов работы, ее научную и практическую значимость.
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Материалы и методы исследований

Работа выполнена на кафедре эпизоотологии и вирусологии ФГОУ ВПО Воронежского государственного аграрного университета им. К.Д. Глинки в период с 2006 по 2009 гг.

При проведении исследований были использованы следующие производственные вакцины и диагностические наборы:

1.Вакцина против гриппа птиц инактивированная эмульгированная штамм H5N1. Серия № 4 М, контроль № 4, изготовленная 08.2007 г. ОАО "Покровский завод биопрепаратов").

2. Набор антигенов и сывороток для диагностики гриппа птиц в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) произведенный ОАО "Покровским заводом биопрепаратов" 06. 2006 г. (серия № 9, контроль № 9).

3. Вакцина против болезни Ньюкасла инактивированная эмульгированная выпускаемая ФГУ ВНИИЗЖ (г. Владимир). Серия № 16, контроль № 16, изготовлена 02. 2008 г.

4. Набор для выявления антител к вирусу ньюкаслской болезни в реакции торможения гемагглютинации, изготовленный ФГУ "ВНИИЗЖ" г.Владимир 11 2007 г. (серия № 12, контроль №12).

В качестве иммуномодулирующих средств применяли:

1. Мирамистин - бензилдиметил[3-(миристоиламино)пропил] аммоний хлорид моногидрат, принадлежащий к классу поверхностно-активных веществ (детергентов), группе катионных четвертичных аммониевых соединений. Препарат разработан группой ученых под руководством Ю. С. Кривошеина в восьмидесятые годы XX века по закрытой программе "Космические биотехнологии" и выпускается ЗАО "Инфамед" г. Москва. Мирамистин обладает уникальным спектром иммуномодулирующих, антимикробных, противогрибковых и вирулицидных свойств, относится к веществам с низкой токсичностью (4 класс).

2. «Фоспренил» – продукт фосфорилирования полипренолов хвои сосны, основной компонент – динатриевая соль фосфата полипренолов, изготавливаемый ЗАО «Микро-плюс» г. Москва. Препарат широко используется в ветеринарной практике в качестве иммуномодулятора, согласно наставлению 0,05 мл/кг массы тела перорально или внутримышечно.

Кровь для гематологических и иммунологических исследований у кур и уток отбирали путем прокола подкрыльцовой вены. Общий анализ крови (гемоглобин, эритроциты, лейкоциты, лейкоформула) проводили по общепринятым методикам. Фагоцитарную способность лейкоцитов оценивали по их фагоцитарной активности, показателям общей фагоцитарной емкости и числа (Митюшников В.М., 1985, Болотников И.А. с соавт., 1980.). Т- и В-лимфоциты в крови определяли методом Е – розеткообразования (Jondal M.et al., 1973, в модификации Цымбала А.И. с соавт., 1983), нулевых клеток – по Froland S.S., Natvig L.B., 1973; Jondal M. et al., 1973; общий белок и его фракции определяли с помощью рефрактометра по Кудрявцеву А.А.(1952).

Остаточное количество мирамистина определяли экстракционно-фотометрическим методом в пробах мышечной ткани птиц, подготовленных по разработанной нами методике, для измерения оптической плотности исследуемого материала использовали спектрофотометр СФ-46.

Количественное определение лизоцима в слизистой носовой полости проводили по методу Гранда Х.Я., Яворского Л.М., Блумберга И.Я. (1973). Цитограмму слизистой оболочки носовой полости определяли с помощью подсчета 100 клеточных элементов в мазках по методу О.Г.Алексеевой (1986). Микробную обсемененность верхнего отдела респираторного тракта птиц и поверхности скорлупы яиц определяли по общепринятой бактериологической методике.

Изучение возможного эмбриотоксического действия мирамистина проводили на 12 дневных развивающихся куриных эмбрионах (n=24), которым вводили препарат в аллантоисную полость в дозах 0,1, 0,2, 0,3, 0,4 и 0,5 мл. Учитывали выводимость цыплят, видимые аномалии развития, живую массу, при вскрытии визуально оценивали размеры и строение внутренних органов.

Для определения вирулицидного действия мирамистина на вирус болезни Ньюкасла использовали куриные эмбрионы (n=66) в возрасте 13 дней, которых инфицировали в аллантоисную полость вакцинным штаммом вируса НБ "Ла Сота" в разведениях от 1:2 до 1:128 с включением 0,2 мл физиологического раствора для контрольной группы и 0,2 мл мирамистина для опытной. Оценку вирулицидного действия мирамистина проводили по количеству выживших куриных эмбрионов и характеру патологоанатомических изменений. Определение специфичности гибели куриных эмбрионов устанавливали в РТГА.

Изучение иммуномодулирующего действия мирамистина и фоспренила при вакцинации птиц против гриппа проводили на цыплятах (n=75) в возрасте 40 дней, а при иммунизации против болезни Ньюкасла на курах (n=75) в возрасте 90 дней.

Напряженность иммунного ответа у птиц оценивали при исследовании сыворотки в РТГА до вакцинации, а также через 21, 28 дней и через 6 месяцев после нее.

В экспериментах использовано – 465 цыплят и кур, 35 уток и 90 куриных эмбрионов, проведено 827 исследований сыворотки в РТГА, 331 гематологических и иммунологических исследований. Опыты проведены согласно требованиям к врачебно-биологическому эксперименту (Фролов И.Т., 1965) по постановке контроля, подбору аналогов, соблюдению одинаковых условий кормления и содержания птицы в период исследований. Схемы проведения опытов изложены в каждом разделе при изучении конкретно поставленных задач.

Экономическая эффективность рассчитана в соответствии с "Методикой определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий", М., 1997 год.

Полученные результаты обрабатывали методом вариационной статистики с применением критерия Стьюдента на персональном компьютере, с использованием интегрального пакета Excel.
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Определение оптимальных доз и способов введения

мирамистина курам

Предварительно были изучены возможные раздражающие свойства мирамистина при внутримышечном и интраназальном введении курам, при этом учитывались местная реакция, температура тела, общее состояние птицы, свидетельствующие об отсутствии негативного действия препарата (n=10).

Определение оптимальной иммуномодулирующей дозы мирамистина в сочетании с вакцинацией против гриппа проводили на 30 цыплятах 40 дневного возраста, которых сформировали в 6 групп по 5 голов в каждой. Цыплятам первой, второй и третьей групп вводили соответственно по 0,1 мл, 0,5 мл и 1,0 мл 0,01% раствора мирамистина в смеси с 0,5 мл вакцины – внутримышечно в область грудной мышцы. Четвертой группе применяли вакцину в том же объеме в сочетании с инстилляцией на слизистую оболочку носовой полости раствора мирамистина в количестве 2-3 капель. Пятой группе на фоне иммунизации интраназально вводили 4-5 капель мирамистина. Шестая группа служила контролем и была иммунизирована только вакциной в дозе 0,5 мл в соответствии с наставлением.

Из представленных данных в табл. 1 следует, что до иммунизации в сыворотке крови цыплят уровень антител составлял в среднем – 0,8±0,2 log2.

Результаты, полученные в ходе исследования, показали зависимость иммунного ответа у птиц от дозы мирамистина и способа его введения. Так, наиболее высокие показатели титра антител были установлены во второй и четвертой опытных группах, в частности, при внутримышечном введении цыплятам 0,5 мл мирамистина – 6,8±0,7 log2 и интраназальном применении –7,0±0,9 log2, соответственно. Наиболее низкий уровень антител по группам - 2,4±0,5 log2, отмечали при сочетании вакцины с 1,0 мл препарата. Титр антител, индуцированный у птиц после применения 0,1 мл мирамистина – 3,6±0,4 log2, несущественно превышал показатели контрольной группы, которые составляли 2,8±0,7 log2.

В пятой группе интраназальная инстилляция цыплятам мирамистина в дозе 4-5 капель не сопровождалась ростом титра антител – 3,2±1,5 log2 и даже несколько уступала показателям четвертой группы.


Таблица 1

Уровень антител в сыворотке крови птицы, иммунизированной против гриппа и болезни Ньюкасла в сочетании с мирамистином

( n=60)

№ группы

Препарат

титр антител на 28 день

фон № 1

до иммунизации

0,8±0,2 log2

1

вакцина ГП + 0,1 мл мирамистина

3,6±0,4log2 ●●***

2

вакцина ГП + 0,5 мл мирамистина

6,8±0,7log2●●●***

3

вакцина ГП + 1,0 мл мирамистина

2,4±0,5log2***

4

вакцина ГП +интраназально 2-3 капли мирамистина

7,0±0,9 log2●●●***

5

вакцина ГП+ интраназально 4-5 капель мирамистина

3,2±1,5 log2 ●●***

6

вакцина ГП контроль

2,8±0,7log2***

фон № 2

до иммунизации

0,5±0,3 log2

7

вакцина БН + 0,1 мл мирамистин

4,3±1,1 log2***

8

вакцина БН + 0,5 мл мирамистин

9,6±1,4 log2●●●***

9

вакцина БН + 1,0 мл мирамистин

3,6±0,5 log2***

10

вакцина БН +интраназально 2-3 капли мирамистина

9,7±1,0 log2●●●***

11

вакцина БН +интраназально 4-5 капель мирамистина

3,8±1,3 log2**

12

вакцина БН контроль

4,4±0,7 log2***

Примечание: достоверность различий *,**,***- к фону;,●●,●●●- к контрольной группе - Р<0,05; 0,01; 0,001, соответственно.
По аналогичной методике определяли оптимальную иммуномодулирующую дозу мирамистина в комбинации с вакцинацией кур инактивированной вакциной против болезни Ньюкасла. При этом были получены схожие результаты, подтверждающие целесообразность внутримышечного введения препарата в объеме 0,5 мл, а при интраназальном 2-3 капли в каждый носовой ход птице.

Подобный дозозависимый характер действия мирамистина на иммуногенез впервые был установлен Шатровым В.А. (1992), который отмечал выраженную стимуляцию у мышей гуморального и клеточного иммунного ответа при введении препарата в дозе 100 мкг/мышь, а в дозе 1000 мкг мирамистин угнетал антителообразование, что в значительной мере подтверждено нами на птице при внутримышечном и интраназальном введениях этого иммуномодулятора. Причем более выраженный стимулирующий эффект на антителогенез у кур при вакцинации их против гриппа и болезни Ньюкасла оказывала интраназальная инстилляция мирамистина, что, по-видимому, связано с непосредственным влиянием препарата на участвующую в иммуногенезе лимфоидную ткань, сосредоточенную у птиц под эпителием слизистых покровов дыхательной системы.

По данным медицинских исследователей (Кривошеин Ю.С. с соавт., 2000) в основе иммуномодулирующего действия мирамистина лежит повышение проницаемости мембран иммунных клеток (лимфоцитов), что приводит к запуску механизмов активации неспецифического иммунного ответа.
  1   2   3

Похожие:

Совершенствование иммунопрофилактики гриппа и болезни Ньюкасла у птиц с применением инактивированных вакцин в сочетании с мирамистином 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология iconМеханизм развития инфекции, вызываемой бациллой турингиензис и влияние бактериальных метаболитов на организм личинок большой восковой моли 16. 00. 03 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология
Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунологией
Совершенствование иммунопрофилактики гриппа и болезни Ньюкасла у птиц с применением инактивированных вакцин в сочетании с мирамистином 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология iconЭтиологическая структура сальмонеллеза и эшерихиоза птиц 06. 02. 02 Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Совершенствование иммунопрофилактики гриппа и болезни Ньюкасла у птиц с применением инактивированных вакцин в сочетании с мирамистином 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология iconБиологические свойства штаммов вируса гриппа h5N1-субтипа, выделенных от диких и домашних птиц в различных регионах россии 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология
Биологические свойства штаммов вируса гриппа h5N1-субтипа, выделенных от диких и домашних птиц в различных регионах россии
Совершенствование иммунопрофилактики гриппа и болезни Ньюкасла у птиц с применением инактивированных вакцин в сочетании с мирамистином 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология iconЭпизоотология и профилактика дизентерии свиней в южном и северо-кавказском федеральных округах 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология
Фгбоу впо «Московская академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. Скрябина»
Совершенствование иммунопрофилактики гриппа и болезни Ньюкасла у птиц с применением инактивированных вакцин в сочетании с мирамистином 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология iconЭтиологическая структура, морфофункциональная характеристика эшерихиоза телят 06. 02. 02 Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Совершенствование иммунопрофилактики гриппа и болезни Ньюкасла у птиц с применением инактивированных вакцин в сочетании с мирамистином 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология iconЭпизоотическая ситуация по сальмонеллезу овец в Северном Дагестане 06. 02. 02. ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология
...
Совершенствование иммунопрофилактики гриппа и болезни Ньюкасла у птиц с применением инактивированных вакцин в сочетании с мирамистином 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология iconОсобенности распространения, профилактики и лечения парагриппа-3 крупного рогатого скота в республике дагестан 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология
Работа выполнена на кафедре эпизоотологии фгоу впо «Дагестанская государственная сельскохозяйственная академия»
Совершенствование иммунопрофилактики гриппа и болезни Ньюкасла у птиц с применением инактивированных вакцин в сочетании с мирамистином 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология iconКомплексная профилактика респираторных болезней свиней с применением вакцины, аллогенной иммунной сыворотки и антибактериальных препаратов 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология
...
Совершенствование иммунопрофилактики гриппа и болезни Ньюкасла у птиц с применением инактивированных вакцин в сочетании с мирамистином 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология iconБиологические свойства бактериофагов к Salmonella typhimurium и их применение в борьбе с сальмонеллезом гоубей 16. 00. 03 Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология
Работа выполнена в Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Московская государственная...
Совершенствование иммунопрофилактики гриппа и болезни Ньюкасла у птиц с применением инактивированных вакцин в сочетании с мирамистином 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология iconПримерная программа наименование дисциплины микробиология, вирусология рекомендуется для направлений подготовки специальности
Дисциплина «Микробиология, вирусология» относится к циклу математических, естественнонаучных дисциплин
Разместите кнопку на своём сайте:
ru.convdocs.org


База данных защищена авторским правом ©ru.convdocs.org 2016
обратиться к администрации
ru.convdocs.org