Инструкция по применению «Люис рпга тест»



Скачать 106.45 Kb.
Дата11.07.2014
Размер106.45 Kb.
ТипИнструкция




ИНСТРУКЦИЯ

по применению «Люис РПГА тест»

Набор реагентов

для определения антител к Treponema pallidum в сыворотке крови

человека при диагностике сифилиса.

1. НАЗНАЧЕНИЕ

Набор реагентов «Люис РПГА тест», далее по тексту – Набор, предназначен для применения в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений при обследовании с целью диагностики сифилиса.


2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА

2.1. Принцип действия


При взаимодействии специфических антител, находящихся в сыворотке (или плазме) крови человека, с диагностикумом, содержащим антигены Treponema pallidum, происходит агглютинация эритроцитов диагностикума.

2.2. Состав набора

Ингредиент

Количество

Описание

Диагностикум

8,5 мл (один флакон)

Суспензия формалинизированных эритроцитов цыпленка, сенсибилизированных антигеном Treponema pallidum. Суспензия







красно-коричневого цвета, при хранении разделяется на 2 фракции: верхнюю – прозрачную светло-желтую жидкость, нижнюю – темно-бурый осадок эритроцитов. Содержит консервант – азид натрия в концентрации 0,1%.

Контрольные эритроциты

8,5 мл (один флакон)

Формалинизированные эритроциты цыпленка, не сенсибилизированные антигеном Treponema pallidum. Суспензия красно-коричневого цвета, при хранении разделяется на 2 фракции: верхнюю – прозрачную светло-желтую жидкость, нижнюю – темно-бурый осадок эритроцитов. Содержит консервант – азид натрия в концентрации 0,1 %.

Положительный контрольный образец (К+)

0,5 мл (один флакон)

Сыворотка (или плазма) крови человека с клинически и серологически подтвержденным диагнозом сифилиса, содержащая антитела к антигенам Treponema pallidum, не содержащая антител к ВИЧ-1,2 и вирусу гепатита С, а также HBsAg. Содержит консервант – азид натрия в концентрации 0,1 %. В РПГА с диагностикумом демонстрирует наличие антител в титре не менее 1:1280. Прозрачная жидкость желтоватого цвета.


Отрицательный контрольный образец (К-)

0,5 мл (один флакон)

Сыворотка (или плазма) здорового человека, не содержащая антител к антигенам Treponema pallidum, ВИЧ-1,2 и вирусу гепатита С, а также HBsAg. Содержит консервант – азид натрия в концентрации 0,1 %. В РПГА с диагностикумом показывает отсутствие антител к антигенам Treponema pallidum. Прозрачная жидкость желтоватого цвета.

Буфер для разведения

20 мл (один флакон)

Прозрачная жидкость желто-оранжевого цвета в стеклянном флаконе объемом 20 мл. Содержит консервант – азид натрия в концентрации 0,1%.

Планшет для микротитрования

2 шт

Планшет гемагглютинационный неразборный с U-образными лунками, в полиэтиленовом пакете с замком.

Набор рассчитан на проведение 100 определений.

3. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ


● При работе с образцами сывороток (или плазмой) крови пациентов следует обращаться как с потенциально инфекционными объектами, соблюдая меры предосторожности (СП 3.3.2.1288-03).

● Не разрешается модифицировать процедуру проведения анализа, сокращать продолжительность времени постановки реакции, использовать реагенты других производителей, а также реагенты других серий Набора «Люис РПГА тест» .

● Необходимо предусмотреть меры по предотвращению перекрёстной контаминации реагентов.

● Компоненты «Люис РПГА тест» содержат 0,1% азида натрия в качестве консерванта, который может быть токсичен при попадании внутрь.



4. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ, НЕОБХОДИМЫЕ ПРИ ПРОВЕДЕНИИ АНАЛИЗА

1. Дозаторы механические со сменными наконечниками, с диапазоном дозирования жидкости 10-100 мкл, 100-1000 мкл;

2. Таймер;

3. Холодильник;

4. Перчатки латексные.
5. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ

Для исследования используют сыворотку (или плазму) крови человека.

Для получения сыворотки свежевзятую кровь, полученную от пациента, инкубируют в термостате при температуре 37 °С в течение 30-60 мин, выдерживают при температуре 4 °С в течение 1,5 ч, после чего центрифугируют в течение 10 мин при 1,5 тыс. об/мин. Не используют образцы со следами бактериального пророста, гемолизированные или хилёзные.

Допускается хранение сывороток при температуре от 2 до 8 °С в течение 5 дней или при минус 20 °С, не более 6 недель.


6. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

6.1. Подготовка реагентов

Все реагенты и образцы до начала исследования выдерживают в течение 30 мин при температуре от 18 до 25 °С.



Перед употреблением диагностикум и контрольные эритроциты (флакон 1 и флакон 2) встряхивают до образования гомогенной суспензии. Не допускается подсыхание диагностикума и контрольных эритроцитов на стенках флаконов в процессе хранения набора.

Для постановки реакции применяют планшеты для микротитрования с U-образными лунками.



Примечание: Реакцию проводят на строго горизонтальной поверхности, не допуская близости приборов, создающих вибрацию.
6.2. Проведение анализа

ВНИМАНИЕ: реакцию с К+ и К- ставят так же, как и с испытуемым образцом сыворотки крови.


Качественный метод

  1. Разведения испытуемой сыворотки готовят непосредственно в лунках планшета для микротитрования, для этого в лунки вносят буфер для разведения (флакон 5) по следующей схеме:

Ряд 1 (вертикальный) 25 мкл

Ряд 2 (вертикальный) 100 мкл

Ряды 3 и 4 (вертикальные) 25 мкл

Вносят 25 мкл тестируемой сыворотки в лунку ряда 1 (получают разведение сыворотки 1:2). Перемешивают содержимое лунки ряда 1 и переносят 25 мкл в лунку ряда 2 (получают разведение сыворот-ки 1:10). Перемешивают содержимое лунки ряда 2 и переносят по 25 мкл в лунку ряда 3 и в лунку ряда 4, перемешивают и удаляют по 25 мкл; лунки рядов 3 и 4, содержащие по 25 мкл разведения 1:20 тестируемой сыворотки, используют для постановки реакции.

Разведение сыворотки 1:20 можно приготовить в лунке ряда 1. Для этого к 190 мкл буфера для разведения (флакон 5) добавляют 10 мкл сыворотки, перемешивают, после чего из этой лунки отбирают по 25 мкл и переносят в лунки рядов 2 и 3. В этом случае для постановки реакции используют лунки 2 и 3 рядов, содержащие по 25 мкл разведения тестируемой сыворотки 1:20.

Разведение исходных сывороток 1:20 допускается делать в микро-

пробирках, например, добавить 10 мкл сыворотки к 190 мкл буфера для разведения (флакон 5) и перемешать. Для постановки реакции в две лунки планшета для микротитрования вносят по 25 мкл приготовленного разведения испытуемой сыворотки.


  1. Добавляют по 75 мкл суспензии диагностикума (флакон 1) в лунки 4-го ряда и по 75 мкл суспензии контрольных эритроцитов (флакон 2) в лунки 3-го ряда. Конечное разведение тестируемой сыворотки составляет 1:80. Необходимо поддерживать сохранение однородности суспензий во флаконах, из которых производится раскапывание. При образовании осадка или намечающемся расслаивании тщательно перемешивают содержимое флакона.

  2. В каждую постановку обязательно включают положительный контроль (К+) (флакон 3) и отрицательный контроль (К-) (флакон 4), входящие в состав набора. Реакцию с контрольными образцами ставят аналогично.

  3. После раскапывания реагентов осторожно покачивают планшет (в течение 1 мин) вручную, чтобы перемешать содержимое лунок. Закрывают планшет и инкубируют его 45-60 мин при комнатной температуре. До учета результатов планшет должен быть неподвижным! Планшет можно оставить на ночь.

  4. Учитывают результаты агглютинации.

Количественный метод


После определения антител в образце сыворотки (или плазме) крови качественным методом на следующем этапе может быть проведен количественный анализ положительных образцов. Начальное разведение сыворотки для количественного определения - 1:80.

Схема постановки реакции следующая:



  1. Вносят по 25 мкл буфера для разведения (флакон 5) в лунки вертикальных рядов 1-8 (количество горизонтальных рядов должно соответствовать количеству образцов) планшета для количественного анализа.

  2. Вносят по 25 мкл буфера для разведения (флакон 5) в лунки вертикальных рядов 1-8 для титрования положительного контроля (К+) (флакон 3).

  3. Вносят по 25 мкл буфера для разведения (флакон 3) в две лунки планшета для постановки реакции с отрицательным контролем (К-) (флакон 4).

  4. Вносят по 25 мкл образца из соответствующей лунки ряда 2 (разведение сыворотки 1:10) планшета, который был использован для постановки качественного метода, в лунку вертикального ряда 1 и 2 планшета, используемого для количественного метода, перемешивают содержимое лунок. Из лунки 1 удаляют 25 мкл.

  5. Из лунки вертикального ряда 2 после перемешивания содержимого переносят 25 мкл в лунку 3. Готовят последовательные двукратные разведения образца в лунках рядов 3-8 (разведение образцов сыворотки от 1:20 до 1:1280). Из последней лунки (ряд 8) отбирают избыточные 25 мкл и удаляют.

  6. Для постановки реакции с отрицательным контролем, в две лунки, содержащие по 25 мкл буфера для разведения (см. п. 1), добавляют по 25 мкл разведения К- 1:10, перемешивают и удаляют по 25 мкл.

  7. Вносят по 75 мкл контрольных эритроцитов (флакон 2) в лунки вертикального ряда 1 и в одну из лунок с К- (конечное разведение исследуемой сыворотки – 1:80).

  8. Вносят по 75 мкл диагностикума (флакон 1) в лунки рядов 2-8, а также во вторую лунку с отрицательным контролем. Конечные разведения исследуемых образцов сыворотки (или плазмы) крови и К+ от 1:80 до 1:5120.

  9. Перемешивают содержимое лунок планшета осторожным покачиванием в течение 1 мин вручную. Закрывают крышкой и оставляют на 45-60 мин при температуре от 18 до 25 °С. До учета результатов планшет должен быть неподвижным! Планшет можно оставить на ночь.

  10. Учитывают результаты реакции.
7. РЕГИСТРАЦИЯ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ

7.1. Общие сведения при учете результатов:

Учет результатов производят визуально по следующей шкале:

4+ - ровный слой агглютинированных эритроцитов по всей поверхности дна лунки («зонтик»), иногда со складчатым краем;

3+ - то же, что и 4+, но с намечающимся кольцом по периферии «зонтика»;

2+ - эритроциты образуют широкое кольцо с выраженным просветом в центре;

1+ - эритроциты образуют более плотное кольцо меньшего размера с небольшим просветом в центре;



  • - компактный осадок эритроцитов со слабо заметным просветом в центре;

- - компактный осадок эритроцитов в центре лунки («пуговка»).

Примечание:

1) Следует обращать внимание на возможный нестандартный вид реакции. Загнутые или неровные края «зонтика» могут быть результатом избытка антител (эффект «прозоны»).

2) В лунках с положительным и отрицательным контролем, а также в лунках с тестируемыми образцами, при добавлении контрольных эритроцитов должно быть отсутствие агглютинации.

3) В лунках с отрицательным контролем и диагностикумом должно быть отсутствие агглютинации.

4) Агглютинация эритроцитов диагностикума при отсутствии агглютинации контрольных эритроцитов свидетельствует о наличии в сыворотке крови специфических антител к Treponema pallidum. Считывание результатов и их интерпретацию производят в сравнении с контролями.

5) Агглютинация контрольных эритроцитов наряду с агглютинацией диагностикума при тестировании пробы свидетельствует о наличии антиэритроцитарных антител. В этом случае тест повторяют. Если при повторной постановке реакции с этой пробой вновь наблюдают агглютинацию не только диагностикума, но и контрольных эритроцитов, то тест проводят после абсорбции испытуемой сыворотки. Для этого к 10 мкл исходной испытуемой сыворотки добавляют 190 мкл контрольных эритроцитов (флакон 2), перемешивают и инкубируют при комнатной температуре в течение 30 мин. Центрифугируют 3 мин при 2000 об/мин. Супернатант (разведение сыворотки 1:20) используют для постановки реакции с суспензией диагностикума и контрольных эритроцитов по стандартному протоколу (25 мкл супернатанта смешивают с 75 мкл диагностикума и 25 мкл супернатанта – с 75 мкл контрольных эритроцитов).



7.2. Интерпретация результатов при качественном методе:

ПОЛОЖИТЕЛЬНЫМИ считаются образцы, реагирующие на 4+ и 3+;

СЛАБОПОЛОЖИТЕЛЬНЫМИ считаются образцы, реагирующие на 2+;

СОМНИТЕЛЬНЫМИ считаются образцы, реагирующие на 1+;

ОТРИЦАТЕЛЬНЫМИ считаются образцы, реагирующие на ± и -.

При постановке реакции качественным методом в случае получения слабоположительных и/или сомнительных результатов рекомендуется протестировать образец повторно. При получении аналогичного результата рекомендуется через некоторое время повторное взятие крови и проведение повторного анализа.



Примечание: Все пробы, дающие слабоположительные и сомнительные результаты, рекомендуется дополнительно исследовать другими методами.

7.3. Интерпретация результатов при количественном методе:

При количественном методе постановки реакции титром положительной сыворотки считается максимальное разведение, дающее результат, соответствующий «1+». При количественном методе в положительном контроле (К+) (флакон 3) должны определяться антитела к T. pallidum в титре не ниже 1:1280.


8. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА

Хранение в соответствии с СП 3.3.2.1248-03 при температуре от 2 до 8 °С в недоступном для детей месте.

ХРАНИТЬ ТОЛЬКО ВЕРТИКАЛЬНО.

Транспортирование в соответствии с СП 3.3.2.1248-03 при температуре от 2 до 8 °С в условиях, исключающих замораживание. Допускается кратковременное (не более 3 сут.) транспортирование при температуре от 9 до 25 °С.

Срок годности - 18 месяцев. Препарат с истекшим сроком годности применению не подлежит.

Условия отпуска. Для диагностики in vitro в лечебно-профилактических и санитарно-противоэпидемических учреждениях.

Рекламации на специфические и физические свойства компонентов набора направлять в адрес предприятия-изготовителя:

ООО «НИАРМЕДИК ПЛЮС» Россия , 125047, г. Москва, ул. 4-я Тверская-Ямская, д. 2/11, строение 2, тел./факс (495) 741-49-89, а также в адрес ФГУ «ГНЦД Росмедтехнологий», 107076, г. Москва, ул. Короленко, д. 3, строение 6, тел. (499) 785-20-15, факс (499) 785-20-16.


К. 7.02.3 В. 270709.


Похожие:

Инструкция по применению «Люис рпга тест» iconИнструкция по применению тест-набора полосок для иммунохроматографического одновременного выявления
Тест для одновременного выявления пяти видов наркотиков (марихуана, амфетамин, кокаин, метамфетамин, морфин)
Инструкция по применению «Люис рпга тест» iconИнструкция по применению Технический редактор Н. Лисицына Корректор Е. Аксенова Компьютерная верстка М. Поташкин
Ф51 Совет директоров: Инструкция по применению / Александр Филатов. — М.: Альпина Бизнес Букс, 2009. — 174 с
Инструкция по применению «Люис рпга тест» iconИнструкция по применению комплексных добавок для бетонов уп-2, уп-4
Инструкцию! Данная инструкция является рекомендательным документом, при разработке которого использовались: «Пособие к СниП 09. 01-85...
Инструкция по применению «Люис рпга тест» iconИнструкция по применению вскройте упаковку, обнажив обе крышечки. Выньте зонд тампон из упаковки, держа его за крышечку колокольчик
Простой тест для обнаружения колиформных микроорганизмов и E. coli в окружающей среде
Инструкция по применению «Люис рпга тест» iconИнструкция по применению габаритов приближения строений гост 9238-83 Взамен Указаний по применению габаритов
Инструкция предназначена для руководства при проектиро­вании, строительстве и эксплуатации железных дорог колеи 1520 (1524) мм общей...
Инструкция по применению «Люис рпга тест» iconИнструкция по применению средства «дп-алтай»
Инструкция предназначена для организаций, имеющих право заниматься дезин­фекционной деятельностью
Инструкция по применению «Люис рпга тест» iconИнструкция по применению дезинфицирующего средства «Бриллиант»
Инструкция предназначена для организаций, имеющих право заниматься дезин­фекционной деятельностью
Инструкция по применению «Люис рпга тест» iconИнструкция по применению тест-системы иммуноферментной для выявления и/или количественного определения антител класса igg к цитомегаловирусу в сыворотке и плазме крови человека
Цитомегаловирус (цмв) представляет собой вирус икосаэдрический формы, 180-250нм в диаметре, принадлежит к семейству герпесвирусов....
Инструкция по применению «Люис рпга тест» iconИнструкция по применению ультрафиолетового излучения при производстве, хранении и перевозке сырья
Инструкция предназначена для организаций и учреждений государственной ветеринарной службы Российской Федерации
Инструкция по применению «Люис рпга тест» iconИнструкция по применению дезинфицирующего средства «Оксилизин» (000 нпф «Экотех», Россия) на предприятиях по производству напитков
Инструкция предназначена для мойщиков и обработчиков технологиче­ских емкостей и коммуникаций
Разместите кнопку на своём сайте:
ru.convdocs.org


База данных защищена авторским правом ©ru.convdocs.org 2016
обратиться к администрации
ru.convdocs.org