Продуктах животного происхождения методом хроматографии в тонком слое



Дата01.01.2013
Размер95.4 Kb.
ТипДокументы
Утверждено
заместителем Главного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
31 июля 1973 года
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ГАММА-ИЗОМЕРА

ГЕКСАХЛОРЦИКЛОГЕКСАНА (ГХЦГ) В ПРИСУТСТВИИ ФЕНОТИАЗИНА В

ПРОДУКТАХ ЖИВОТНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ МЕТОДОМ

ХРОМАТОГРАФИИ В ТОНКОМ СЛОЕ

(МЕТОДИЧЕСКОЕ УКАЗАНИЕ)
Гамма-изомер гексахлорциклогексана (ГХЦГ) - пестицид, обладающий широким диапазоном

инсектицидного действия. Он эффективен против вредителей садовых, овощных, бобовых и

зерновых культур, картофеля, сахарной свеклы, хлопчатника, подсолнечника и др.
Фенотиазин - антигельминт, широко применяющийся в ветеринарии для профилактической

дегельминтизации крупного рогатого скота, овец, коз, свиней, а также домашней птицы (кур, гусей,

уток). Препарат скармливается животным с пищей.
Краткие сведения о физико-химических свойствах препаратов
    Гамма-изомер  ГХЦГ  обладает  наибольшей  инсектицидной 

активностью из
известных   в   настоящее   время  восьми  изомеров 

гексахлорциклогексана.
Химически  чистый гамма-изомер ГХЦГ представляет собой бесцветные

кристаллы
                                                                 5
без запаха с температурой плавления 112 °C, летучестью - 9,8 х 10 

мг/л при
20  °C и 750 мм рт. ст. Препарат хорошо растворяется во многих

органических
растворителях  (ацетоне,  бензоле, дихлорэтане, ксилоле, метаноле,

этаноле,
четыреххлористом  углероде,  хлороформе  и  др.),  а также в жирах и
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.
жирных
кислотах. Растворимость его в воде составляет 10 мг/л.
Гамма-изомер ГХЦГ устойчив на воздухе, в воде, на свету и при нагревании. Он не разрушается

сильными кислотами, но при действии щелочей отщепляет хлористый водород, образуя

трихлорбензолы.
Для использования в сельском хозяйстве выпускаются гранулированные препараты гамма-

изомера ГХЦГ 2% и 4%, 50-процентный смачивающийся порошок, 16-процентная

минеральномасляная эмульсия; наряду с этим гамма-изомер ГХЦГ входит в состав следующих

протравителей: гаммагексана, меркургексана, тигама, фентиурама и меркурана.
Фенотиазин (тиофениламин, дибензоимазин). Химически чистый препарат фенотиазина

представляет собой кристаллическое вещество, бесцветное или слегка желтоватое. Температура

плавления его 180 - 181 °C. Он хорошо растворяется в ряде органических растворителей

(хлороформе, диметилформамиде, бензоле, ацетоне), мало растворим в этаноле, петролейном эфире,

практически нерастворим в воде.

Фенотиазин легко окисляется, особенно в присутствии солнечного света и влаги. Такие

окислители, как перекись водорода, перманганат калия, гипохлорит калия, хромовый ангидрид,

нитрит натрия окисляют фенотиазин до сульфоксидов и сульфонов. При взаимодействии с дымящей

азотной кислотой фенотиазин образует динитропроизводные (2, 7-динитрофенотиазин и др.).
Препараты фенотиазина, поступающие в продажу, обычно содержат 1% нетоксичного продукта

окисления его зеленого цвета.
Принцип метода
Метод основан на извлечении гамма-изомера ГХЦГ и фенотиазина из пищевого продукта

органическими растворителями, удалении мешающих определению примесей путем жидкостного

перераспределения с последующей очисткой экстракта на активированной окиси алюминия и

хроматографировании в тонком слое силикагеля.
Минимально детектируемое количество гамма-изомера ГХЦГ в хроматографируемом объеме 0,2

мкг, фенотиазина - 0,1 мкг.
Чувствительность метода для гамма-изомера ГХЦГ и фенотиазина - 0,003 мг/пробе или 0,12

мг/кг продукта. Процент определения - 75 - 80.
Применимость метода
Метод предназначен для определения остаточных количеств гамма-изомера ГХЦГ и

фенотиазина в говяжьем мясе, курином мясе, яйцах, коровьем молоке.
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.
Реактивы и растворы
н-Гексан, х.ч., перегнанный.
н-Гексан, х.ч., перегнанный, насыщенный диметилформамидом.
Диметилформамид, чистый, насыщенный н-гексаном.
Ацетон, х.ч., перегнанный.
Гексан-ацетон - смесь (2:1).
Натрий сернокислый, ч.д.а., безводный и 2-процентный водный раствор.
Алюминия окись, безводная или 11 степени активности, активированная в течение 4 часов при

температуре 600 - 800 °C и деактивированная перед употреблением водой (5% воды от веса окиси

алюминия) посредством растирания в ступке.
Диэтиловый эфир, х.ч.
Уксусная кислота ледяная.
Подвижный растворитель - гексан:диэтиловый эфир:уксусная кислота = 75:25:2.
Дифениламин - 1-процентный раствор в ацетоне.
Стандартные растворы: гамма-изомера ГХЦГ в гексане - 100 мкг/мл и 10 мкг/мл; фенотиазина в

хлороформе - 100 мкг/мл и 10 мкг/мл.
Пластинки для хроматографии "Silufol", производство Чехословакии "Kavalier".
Приборы и посуда
Колбы для экстракции, емкостью 700 - 1000 мл.
Колбы Бунзена, емкостью 300 - 500 мл.
Воронки Бюхнера, диаметром 10 - 12 см.
Воронки делительные, емкостью 150, 500 мл.
Колбы круглодонные, емкостью 50, 150, 250 мл.
Колонка хроматографическая, стеклянная, размером 470 х 10 мм, заполненная следующим

образом: в узкий конец колонки помещают ватный тампон и наливают взвесь 10 г деактивированной

окиси алюминия в гексане. После осаждения адсорбента и его уплотнения с помощью разрежения,

создаваемого вакуумным насосом, насыпают слой безводного сульфата натрия высотой 5 - 6 см и

промывают колонку гексаном.
Устройство для удаления растворителей (ротационный испаритель, водоструйный насос и др.).
Пульверизатор стеклянный.
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.
Аппарат для встряхивания.
Центрифуга со скоростью 2500 - 4000 об./мин.
Микропипетки.
Пипетки Мора.
Источник ультрафиолетового света, ртутно-кварцевая лампа ПРК-4 или ПРК-2.
Подготовка проб для анализа
Мясо (говяжье, куриное). Среднюю пробу весом 0,5 кг измельчают с помощью мясорубки,

тщательно перемешивают и берут навеску в 25 г.
Яйцо куриное. Среднюю пробу яиц - 5 - 10 штук, в зависимости от величины партии,

освобождают от скорлупы, помещают в химический стакан и тщательно взбалтывают до однородной

массы, после чего берут для анализа часть смеси, соответствующую 1/2 яйца.
Подготовленные навески растирают в фарфоровой ступке с безводным сульфатом натрия до

образования сыпучей массы. Затем количественно переносят их в колбы для экстракции, заливают

200 мл смеси гексана и ацетона (2:1) и экстрагируют на аппарате для встряхивания в течение 30

минут. После этого жидкую фазу сливают и повторяют экстракцию со 100 мл смеси. Полученные

экстракты объединяют.
Молоко. Среднюю пробу молока (0,5 л) тщательно перемешивают и аликвот объемом 25 мл

помещают в колбу, туда же добавляют 50 мл ацетона, перемешивают и приливают 50 мл гексана.

Пробу экстрагируют в течение 30 минут на аппарате для встряхивания. Затем смесь центрифугируют

на центрифуге со скоростью 2500 - 4000 об./мин., в результате чего достигается хорошее разделение

фаз: верхняя - гексановая, средняя - твердая, белковая и нижняя - водно-ацетоновая. Гексановую фазу

с помощью пипетки Мора и резиновой груши осторожно переносят в колбу для удаления

растворителя и отгоняют его до объема 5 - 10 мл.
Ход анализа
Объединенные экстракты (яиц и мяса) помещают на 1,5 - 2 часа в морозилку холодильника, а

затем фильтруют в колбу Бунзена через воронку Бюхнера с двойным бумажным фильтром, используя

водоструйный или вакуумный насос. Колбу дважды ополаскивают порциями охлажденной

гексаново-ацетоновой смеси (2:1). Фильтрат количественно переносят в круглодонную колбу и

удаляют растворитель до объема 5 - 10 мл.
Очистку экстрактов для всех объектов, включая молоко, проводят посредством жидкостного

перераспределения в системе гексан-диметилформамид. Для этого объем экстракта доводят гексаном

до 25 мл, переносят в делительную воронку и извлекают из него гамма-изомер ГХЦГ и фенотиазин

посредством трехкратного встряхивания экстракта с 10 мл порциями диметилформамида,

насыщенного гексаном. Гексановую фракцию отбрасывают и для более полного удаления жира
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.
промывают объединенный диметилформамидный экстракт 20 мл гексана, насыщенного

диметилформамидом. Затем гексановый слой отбрасывают, а диметилформамидный переносят в

другую делительную воронку (0,5 л) с 400 мл 20-процентного водного раствора сульфата натрия,

добавляют 10 мл гексана, встряхивают и оставляют на 15 - 20 минут для расслоения. После этого

отделяют слой гексана, а водный экстрагируют еще раз 10 мл гексана.
Объединенные гексановые экстракты отгоняют до объема 10 мл и переносят в

хроматографическую колонку, заполненную в соответствии с прописью окисью алюминия в тот

момент, когда слой гексана над сульфатом натрия имеет высоту не менее 1,0 см.

Хроматографирование проводят на первом этапе самотеком. Элюируют гамма-изомер ГХЦГ и

фенотиазин 90 мл гексана, который следует вносить в колонку, предварительно ополоснув им колбу,

в которой находился экстракт, после того, как высота экстракта над сульфатом натрия не превышает

0,5 - 1,0 см. Для ускорения элюирования можно использовать небольшое разрежение, создаваемое

водоструйным или вакуумным насосом. К этому приему следует прибегать не раньше, чем третья

порция гексана после экстракции пройдет через колонку.
В дальнейшем ходе анализа из полученного элюата удаляют растворитель досуха. Растворяют

сухой остаток в 0,5 мл гексана (используя градуированную пробирку) и наносят аликвот раствора (20,

40, 60, 100 мкл) с помощью микропипетки на пластинку "Silufol", рядом, как обычно, наносят

различные количества стандартных растворов гамма-изомера ГХЦГ и фенотиазина.
Пластинку помещают в хроматографическую камеру со смесью гексана:диэтилового

эфира:уксусной кислоты = 75:25:2. После поднятия фронта растворителя на 10 - 12 см пластинку

вынимают из камеры и оставляют на несколько минут для удаления подвижного растворителя, при

этом фенотиазин проявляется в виде четких розовых пятен, которые становятся голубовато-зелеными

после опрыскивания пластинки 1-процентным раствором дифениламина в ацетоне и облучения в

ультрафиолетовом свете. Гамма-изомер ГХЦГ при этом проявляется в виде темно-синих или темно-

серых пятен. Rf гамма-изомера ГХЦГ = 0,36, Rf фенотиазина = 0,18 (для ДДТ Rf = 0,53, для альфа-

изомера ГХЦГ Rf = 0,43 при данных условиях).
Количественное определение проводят путем сравнения размера пятна пробы и стандартного

раствора, а также по интенсивности окраски пятен. Для фенотиазина это можно сделать на двух

этапах: после извлечения пластинки из камеры и после облучения УФ-светом. Для гамма-изомера

ГХЦГ - только на конечном этапе, после облучения.
Расчет анализа производят по формуле:
                                   А х 1000
                               Х = --------,
                                      В
где:
Х - содержание препарата в пробе, в мг/кг;
А - количество препарата, найденное путем визуального сравнения размера и интенсивности

пятен пробы и стандартных растворов, мкг;
В - вес части исследуемой пробы, которому соответствует нанесенный на пластинку аликвот
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.
конечного раствора.
Подготовлено в Институте питания АМН СССР.
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.

Похожие:

Продуктах животного происхождения методом хроматографии в тонком слое iconМетодические указания по измерению концентраций набу в воздухе рабочей зоны методом тонкослойной хроматографии
Принцип метода. Метод основан на хроматографировании набу в тонком слое силикагеля
Продуктах животного происхождения методом хроматографии в тонком слое iconМетодические указания по определению харэлли в воде методом хроматографии в тонком слое
Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава рф,...
Продуктах животного происхождения методом хроматографии в тонком слое iconЛекарственное сырье животного происхождения и природные продукты
Фармакогнозия занимается изучением лекарственного сырья и продуктов животного происхождения
Продуктах животного происхождения методом хроматографии в тонком слое iconНатуральные волокна животного происхождения. Свойства шерстяных и шелковых тканей
Создать пространство эмоционально-ценностной комфортности и мотивации деятельности учащихся при ознакомлении их с получением натуральных...
Продуктах животного происхождения методом хроматографии в тонком слое iconУрока Элементы содержания Требования к уровню подготовки обучающихся Вид контроля
Выполнение с помощью стеки узора или рисунка на тонком слое пластилина, нанесённого
Продуктах животного происхождения методом хроматографии в тонком слое iconIii жиры и масла животного или растительного происхождения и продукты их расщепления; готовые пищевые жиры; воски животного или растительного происхождения
Происхождения и продукты их расщепления; готовые пищевые жиры; воски животного или растительного происхождения
Продуктах животного происхождения методом хроматографии в тонком слое iconВетеринарно-санитарный контроль остаточных количеств антибиотиков в сырье и продуктах животного происхождения на основе современных методологий 16. 00. 06 ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза
Уальность проблемы. Концепция государственной политики здорового питания населения России на период до 2010 года предусматривает...
Продуктах животного происхождения методом хроматографии в тонком слое iconЖиры и масла животного или растительного происхождения и продукты их расщепления; готовые пищевые жиры; воски животного или растительного происхождения группа 15
Готовые пищевые продукты, содержащие более 15 мас.% продуктов товарной позиции 0405
Продуктах животного происхождения методом хроматографии в тонком слое iconРегламент Комитета по ветеринарии и охране животного мира Мурманской области по предоставлению государственной услуги
Согласование нормативно-технической и технологической документации на новые виды продукции животного происхождения, кормов, кормовых...
Продуктах животного происхождения методом хроматографии в тонком слое iconО методах акустической диагностики пространственного распределения всплывающих пузырьков газа в воде
Данная установка позволяет изучать как прямое, так и обратное рассеяние акустических сигналов на тонком хаотическом слое всплывающих...
Разместите кнопку на своём сайте:
ru.convdocs.org


База данных защищена авторским правом ©ru.convdocs.org 2016
обратиться к администрации
ru.convdocs.org