Утверждаю Руководитель Департамента госсанэпиднадзора Минздрава России А.А.МОНИСОВ 18 января 1999 г. N 1100/83-99-23 Дата введения: с момента утверждения 4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ЭКСПРЕСС-МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ
ПОКАЗАТЕЛЕЙ КАЧЕСТВА ПИТЬЕВОЙ ВОДЫ, ВОДЫ ПОВЕРХНОСТНЫХ
И ПОДЗЕМНЫХ ИСТОЧНИКОВ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ Методические указания разработаны творческим коллективом в составе: Военная академия
Зубарев А.Ф., НИИ экологии человека и гигиены окружающей среды имени А.Н. Сысина РАМН
Доскина Т.В., Рахманин Ю.А., Недачин А.Е., Михайлова Р.И., Федеральный центр
госсанэпиднадзора Минздрава России Стреляева Н.Е., Кривопалова Н.С., Подунова Л.Г., Скачков
В.Б. Утверждены и введены в действие. Введены впервые. 1. Область применения Настоящие методические рекомендации являются первым опытом методического обеспечения
экспресс-контроля качества питьевой воды и воды источников хозяйственно-питьевого
водоснабжения по микробиологическим показателям, введенным: СанПиНом "Требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения.
Контроль качества" 2.1.4.559; Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд. ГОСТом 2761 "Контроль качества воды поверхностных и подземных водоисточников", и
предназначены для микробиологов городских, районных, областных, краевых и республиканских
центров госсанэпиднадзора и специалистов ведомственных лабораторий, осуществляющих контроль
качества воды. Методики регламентируют проведение микробиологического экспресс-контроля
загрязнения воды. Экспресс-метод определения общего микробного числа хемилюминесцентным методом Настоящие методические рекомендации устанавливают методику хемилюминесцентного
количественного определения в 1 куб. см воды централизованного хозяйственного питьевого
водоснабжения и в поверхностных водоисточниках клеток мезофильных и мезотрофных бактерий в
вегетативной форме. 1. Принцип методики Количественное определение клеток бактерий в вегетативной форме в воде основано на их
способности инициировать хемилюминесценцию люминола в щелочной среде, интенсивность
которой пропорциональна числу клеток, находящихся в анализируемой пробе. 2. Чувствительность и сущность метода Бактериальные клетки в вегетативной форме могут быть обнаружены хемилюминесцентным
методом в количестве 2 КОЕ/куб. см. Определению не мешают продукты метаболизма бактериальных
клеток, их отмершие фрагменты, катионы металлов с переменной валентностью в концентрациях до
одного ПДК. Определение проводят на хемилюминометре ЛИК, концентрирование клеток на
мембранный фильтр не проводят. 3. Средства измерений, материалы и реактивы 3.1. Средства измерений Хемилюминометр ЛИК ТУ 000.000.АЖП 3.2. Вспомогательные устройства Дозатор пипеточный ТУ 64-1-3329 Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд. Пробоотборник для отбора проб воды Пинцет Стерильный флакон с притертой пробкой вместимостью 0,5 куб. дм 3.3. Материалы Бумага фильтровальная ГОСТ 12026 Мембранный фильтр "Владисарт" для ОМЧ SM-13806, поры 0,45 мкм БГКП-SM-13906 3.4. Реактивы Натрий серноватистокислый СТ СЭВ 223 Реактив на основе люминола 3%-ный водный раствор перекиси водорода Вода дистиллированная ГОСТ 6709 Спирт этиловый реактификованный ГОСТ 5962 4. Требования по безопасности 4.1. При работе с реактивом и спиртом соблюдаются требования безопасности, установленные
для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005. 4.2. При работе на приборе ЛИК соблюдают правила электробезопасности в соответствии с
ГОСТ 12.1.019 и инструкцией по эксплуатации прибора. 5. Требования к квалификации оператора К выполнению измерений допускаются лица, имеющие квалификацию лаборант с опытом
работы на приборе ЛИК и прошедшие обучение в ФЦ ГСЭН МЗ РФ. 6. Условия проведения измерений Измерения проводятся при атмосферном давлении 730 - 760 мм рт. ст., температуре
окружающего воздуха (20 +/- 15 °С) в лабораторных или полевых условиях при отсутствии
атмосферных осадков. Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд. 7. Подготовка к выполнению измерений 7.1. Прибор ЛИК готовят к работе в соответствии с инструкцией по эксплуатации. 7.2. Приготовление рабочего реактива. В чистую пробирку пипеточным дозатором наливают 0,2 куб. см 3%-ной водной перекиси
водорода и прибавляют к ней 6,0 +/- 0,1 куб. см реактива. Приготовленный рабочий реактив годен для анализа в течение 24 часов с момента его
приготовления. 7.3. Приготовление исходных разведений чистых культур E.coli или Вас. subtilis (Вас. cereus) для
построения градуировочного графика в диапазоне концентраций клеток от 10 до 100 КОЕ/куб. см. С косячка или из чашки Петри с помощью петли (крючка) переносят колонию чистой культуры в
стерильную пробирку с соблюдением мер стерильности и добавляют в нее стерильный физраствор
объемом 10,0 куб. см. Содержимое тщательно перемешивают до исчезновения видимых сгустков и
фильтруют через 3-слойный марлевый стерильный фильтр. После фильтрации исходного разведения с помощью стандартов мутности или камеры Горяева-
Тома определяют исходную концентрацию бактериальных клеток. Готовят серию разведений с соблюдением мер стерильности следующим образом. От исходного
разведения отбирают 2,0 +/- 0,1 куб. см, помещают в стерильную пробирку и добавляют в нее 2,0 +/-
0,1 куб. см стерильного физраствора. Пробирку закрывают пробкой и содержимое перемешивают
встряхиванием в течение 3-х минут. Аналогичным образом готовят все остальные разведения до
конечной концентрации, равной 10 +/- 5 КОЕ/куб. см. 7.4. Построение градуировочного графика. 7.4.1. Определение фона (сигнала) от стерильного раствора. Передвигают крышку прибора ЛИК
до упора вперед, снимают крышку-дозатор, наливают в кювету из стекла 0,3 куб. см рабочего
реактива, устанавливают кювету с реактивом в реакционную камеру прибора и закрывают ее
крышкой-дозатором. В полость крышки-дозатора наливают 0,1 куб. см стерильного физраствора, крышку прибора
передвигают до упора назад и нажимают на нее рукой. С индикатора прибора снимают показания и записывают их в рабочий блокнот. Операцию
повторяют 3 раза, вычисляют среднее значение и записывают полученный результат в рабочий
журнал. 7.4.2. Анализ разведения бактериальной культуры. Анализ приготовленного разведения бактериальной культуры начинают с разведения,
содержащего 10 +/- 5 КОЕ/куб. см, и проводят в той же последовательности, как указано в п. 7.4.1. Внимание!!! Реактив и разведения бактериальной культуры отбирать разными наконечниками дозатора
пипеточного во избежание загрязнения реактива. Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд. По окончании анализа разведения культуры из вычисленных средних значений показаний
прибора вычитают показания фона от физраствора и получают истинные значения
хемилюминесцентного анализа. 7.4.3. Построение градуировочного графика. Градуировочный график строят на миллимитровой бумаге в координатах: величина
измеренного сигнала - концентрация клеток бактерий в анализируемом разведении. В последующем
график уточняют после поверки (ремонта) прибора или по усмотрению (желанию) специалиста-
микробиолога. 8. Определение общего микробного числа в пробах воды 8.1. Отбор проб воды. 8.1.1. Вода из сети централизованного водоснабжения отбирается во флаконы объемом 0,5 куб.
дм. Для этого во флаконы вносят по 10 г серноватистокислого натрия и стерилизуют их
установленным образом. После стерилизации в них отбирают пробу хлорированной воды объемом
490 +/- 5 куб. см. 8.1.2. Вода из водоисточников децентрализованного водоснабжения. Пробы воды отбирают в стерильные флаконы объемом 0,5 куб. дм батометром с соблюдением
мер стерильности. 8.2. Определение фона (сигнала) воды. Флакон с пробой воды вскрывают, отбирают стерильной пипеткой 5 куб. см воды, фильтруют
ее через 2-слойный бумажный фильтр и определяют фон (сигнал), как указано в п. 7.4.1. 8.3. Определение числа клеток бактерий в анализируемой пробе в вегетативной форме. Содержимое флакона тщательно перемешивают встряхиванием в течение 3-х минут и
анализируют на приборе, как указано в п. 7.4.1. Из полученной средней величины сигнала вычитают
величину фона воды, полученную по п. 8.2, и по градуировочному графику определяют искомую
концентрацию бактерий в воде. 8.4. Определение бактерий в воде в споровой форме. 8.4.1. Приготовление жидкой питательной среды. На аналитических весах взвешивают 5 г пептона, 5 г натрия хлористого, 5 г глюкозы и
растворяют их в 1 куб. дм стерильной дистиллированной воды. 5 Полученную смесь стерилизуют при 112 °С (0,49 х 10 Па) 12 минут. 8.4.2. Отобранную пробу воды тщательно перемешивают в течение 3 минут встряхиванием, Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд. отбирают от нее 8 +/- 0,1 куб. см в стерильную чистую пробирку, куда добавляют 2 +/- 0,1 куб. см
встряхиванием в течение 1 минуты и помещают на 4 часа в термостат при температуре (37 +/- 0,5
°С). 8.4. По истечении 4 часов термостатирования пробы содержимое пробирки перемешивают
встряхиванием в течение 1 минуты и анализируют на приборе, как указано в п. 7.4.1. Из полученного
среднего значения показания прибора вычитают величину показания (сигнала), полученную по п.
8.3, и по градуировочному графику определяют концентрацию бактерий в споровой форме. 8.5. Общее содержание клеток мезофильных и мезотрофных бактерий в анализируемой пробе
будет равно сумме клеток, полученных по п. 8.3 и п. 8.4. Экспресс-метод определения колифагов хемилюминесцентным методом Настоящие методические указания устанавливают методику определения колифагов в 100 куб.
см воды в системах централизованного и децентрализованного хозяйственно-питьевого
водоснабжения. 1. Принцип метода Определение колифагов в воде основано на контроле изменения интенсивности
хемилюминесценции люминола в щелочной среде, инициируемой лизисными и нелизисными
клетками E.coli. 2. Чувствительность и сущность метода определения Чувствительность метода составляет 2 КОЕ/куб. см. Сущность метода состоит в сравнении
изменения интенсивности хемилюминесценции люминола, инициируемой в щелочной среде
клетками E.coli, до и после контаминации их с колифагами в течение определенного времени.
Определению не мешают продукты метаболизма, отмершие клетки и питательная среда. 3. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд. 3.1. Средства измерений Хемилюминометр ЛИК ТУ 000.000.АЖП 3.2. Вспомогательные устройства Дозатор пипеточный ТУ 64-1-33-29 Батометр Пробирки микробиологические Термостат электрический с автоматическим терморегулятором до 50 °С Флакон объемом 150 куб. см 3.3. Материалы Бумага фильтровальная ГОСТ 12026 3.4. Реактивы Реактив на основе люминола 3% водный раствор перекиси водорода Спирт этиловый ректификованный, мясопептонный бульон ГОСТ 5962 4. Требования по безопасности 4.1. При работе с реактивами и этиловым спиртом соблюдаются правила безопасности по
ГОСТ 1.005. 4.2. При выполнении измерений с использованием прибора ЛИК соблюдают правила по ГОСТ
12.1.019 и инструкции по эксплуатации прибора. 5. Требования к квалификации операторов К выполнению измерений допускаются лица, имеющие квалификацию лаборант и опыт работы
на приборе ЛИК и прошедшие обучение в ФЦ ГСЭН МЗ РФ. 6. Условия измерения Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд. Измерения проводят при атмосферном давлении 730 - 760 мм рт. ст., температуре окружающей
среды (20 +/- 15) °С в лабораторных и полевых условиях. 7. Подготовка и выполнение определений 7.1. Прибор ЛИК готовят к работе в соответствии с инструкцией по эксплуатации. 7.2. Приготовление рабочего реактива. В чистую пробирку дозатором пипеточным наливают 0,3 куб. см 3% водной перекиси водорода
и прибавляют к ней 6,0 +/- 0,1 куб. см реактива. Рабочий реактив годен для анализа в течение 24 часов с момента его приготовления. 7.3. Подготовка проб к анализу. Отобранную для анализа пробу воды разливают в три стерильных флакона по 100 куб. см в каждой и добавляют в них по 0,5 куб. см 9 суспензии E.coli концентрации 10 (стандарт мутности 10 ед.), 1 куб. см концентрированного мясопептонного бульона. Содержимое перемешивают встряхиванием в течение 1 минуты и закрывают крышками. Параллельно в стерильный флакон наливают 100 куб. см стерильной дистиллированной воды (водопроводная вода не используется!!!), добавляют в нее 0,5 куб. см суспензии E.coli 9 концентрацией 10 КОЕ/куб. см, 0,1 куб. см мясопептонного бульона и содержимое перемешивают встряхиванием в течение 1 минуты. Флакон закрывают крышкой и его содержимое используют для контроля (контрольная проба). 8. Определение колифагов в пробе воды Приготовленные контрольную пробу и пробы анализируемой воды поочередно анализируют на
приборе. Для этого крышку прибора передвигают до упора вперед, снимают крышку-дозатор, в Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд. кювету из стекла наливают 0,3 куб. см рабочего реактива и устанавливают его в реакционную камеру. Камеру закрывают крышкой дозатором и в ее полость, сменив наконечник пипеточного
дозатора на чистый, наливают 0,1 куб. см смеси контрольной пробы. Передвигают крышку прибора
до упора назад, нажимают на нее рукой и снимают показания прибора. Анализ повторяют три раза,
вычисляют среднее значение и записывают в блокнот. После анализа контрольную пробу и пробы анализируемой воды термостатируют в течение 2
час. 15 мин. при температуре 37 +/- 1 °С и проводят анализ проб в той же последовательности:
сначала контрольную пробу, а затем пробы анализируемой воды, вычисляют средние значения и
сравнивают их между собой. Если показания хотя бы одной из анализируемых проб воды больше
показаний контрольной пробы, то в анализируемой воде присутствуют колифаги.
Физические показатели качества воды Температура воды поверхностных источников зависит от температуры воздуха, его влажности, скорости и характера движения воды и ряда...
«Гидросфера. Воды суши» Постоянный поток воды, текущий в русле и питающийся за счет поверхностных и подземных вод, называется
Экология чистая вода – новое качество жизни Это наглядно подтверждают исследования, Госкомэкологии рф, который проводил опрос населения оценки им качества питьевой воды. Большинство...