Экспресс-метод определения микробиологических показателей качества питьевой воды, воды поверхностных и подземных источников

Скачать 330.43 Kb.

страница	1/3
Дата	11.10.2012
Размер	330.43 Kb.
Тип	Методические указания

1 2 3

Утверждаю
Руководитель Департамента
госсанэпиднадзора
Минздрава России
А.А.МОНИСОВ
18 января 1999 г. N 1100/83-99-23
Дата введения:
с момента утверждения
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

ЭКСПРЕСС-МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ

ПОКАЗАТЕЛЕЙ КАЧЕСТВА ПИТЬЕВОЙ ВОДЫ, ВОДЫ ПОВЕРХНОСТНЫХ

И ПОДЗЕМНЫХ ИСТОЧНИКОВ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
Методические указания разработаны творческим коллективом в составе: Военная академия

химической защиты Ишутин В.А., Стехин А.А., Яковлева Г.В., Корякин Ю.Н., ВЦМК "Защита"

Зубарев А.Ф., НИИ экологии человека и гигиены окружающей среды имени А.Н. Сысина РАМН

Доскина Т.В., Рахманин Ю.А., Недачин А.Е., Михайлова Р.И., Федеральный центр

госсанэпиднадзора Минздрава России Стреляева Н.Е., Кривопалова Н.С., Подунова Л.Г., Скачков

В.Б.
Утверждены и введены в действие.
Введены впервые.
1. Область применения
Настоящие методические рекомендации являются первым опытом методического обеспечения

экспресс-контроля качества питьевой воды и воды источников хозяйственно-питьевого

водоснабжения по микробиологическим показателям, введенным:
СанПиНом "Требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения.

Контроль качества" 2.1.4.559;
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.
ГОСТом 2761 "Контроль качества воды поверхностных и подземных водоисточников", и

предназначены для микробиологов городских, районных, областных, краевых и республиканских

центров госсанэпиднадзора и специалистов ведомственных лабораторий, осуществляющих контроль

качества воды. Методики регламентируют проведение микробиологического экспресс-контроля

загрязнения воды.
Экспресс-метод определения общего микробного
числа хемилюминесцентным методом
Настоящие методические рекомендации устанавливают методику хемилюминесцентного

количественного определения в 1 куб. см воды централизованного хозяйственного питьевого

водоснабжения и в поверхностных водоисточниках клеток мезофильных и мезотрофных бактерий в

вегетативной форме.
1. Принцип методики
Количественное определение клеток бактерий в вегетативной форме в воде основано на их

способности инициировать хемилюминесценцию люминола в щелочной среде, интенсивность

которой пропорциональна числу клеток, находящихся в анализируемой пробе.
2.
Чувствительность и сущность метода
Бактериальные клетки в вегетативной форме могут быть обнаружены хемилюминесцентным

методом в количестве 2 КОЕ/куб. см. Определению не мешают продукты метаболизма бактериальных

клеток, их отмершие фрагменты, катионы металлов с переменной валентностью в концентрациях до

одного ПДК. Определение проводят на хемилюминометре ЛИК, концентрирование клеток на

мембранный фильтр не проводят.
3. Средства измерений, материалы и реактивы
    3.1. Средства измерений
Хемилюминометр ЛИК                                 ТУ 000.000.АЖП
    3.2. Вспомогательные устройства
Дозатор пипеточный                                 ТУ 64-1-3329
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.
Пробоотборник для отбора проб воды
Пинцет
Стерильный флакон с притертой пробкой
вместимостью 0,5 куб. дм
    3.3. Материалы
Бумага фильтровальная                              ГОСТ 12026
Мембранный фильтр "Владисарт"
для ОМЧ SM-13806, поры 0,45 мкм                    БГКП-SM-13906
    3.4. Реактивы
Натрий серноватистокислый                          СТ СЭВ 223
Реактив на основе люминола
3%-ный водный раствор перекиси водорода
Вода дистиллированная                              ГОСТ 6709
Спирт этиловый реактификованный                    ГОСТ 5962
4. Требования по безопасности
4.1. При работе с реактивом и спиртом соблюдаются требования безопасности, установленные

для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005.
4.2. При работе на приборе ЛИК соблюдают правила электробезопасности в соответствии с

ГОСТ 12.1.019 и инструкцией по эксплуатации прибора.
5. Требования к квалификации оператора
К выполнению измерений допускаются лица, имеющие квалификацию лаборант с опытом

работы на приборе ЛИК и прошедшие обучение в ФЦ ГСЭН МЗ РФ.
6. Условия проведения измерений
Измерения проводятся при атмосферном давлении 730 - 760 мм рт. ст., температуре

окружающего воздуха (20 +/- 15 °С) в лабораторных или полевых условиях при отсутствии

атмосферных осадков.
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.
7. Подготовка к выполнению измерений
7.1. Прибор ЛИК готовят к работе в соответствии с инструкцией по эксплуатации.
7.2. Приготовление рабочего реактива.
В чистую пробирку пипеточным дозатором наливают 0,2 куб. см 3%-ной водной перекиси

водорода и прибавляют к ней 6,0 +/- 0,1 куб. см реактива.
Приготовленный рабочий реактив годен для анализа в течение 24 часов с момента его

приготовления.
7.3. Приготовление исходных разведений чистых культур E.coli или Вас. subtilis (Вас. cereus) для

построения градуировочного графика в диапазоне концентраций клеток от 10 до 100 КОЕ/куб. см.
С косячка или из чашки Петри с помощью петли (крючка) переносят колонию чистой культуры в

стерильную пробирку с соблюдением мер стерильности и добавляют в нее стерильный физраствор

объемом 10,0 куб. см. Содержимое тщательно перемешивают до исчезновения видимых сгустков и

фильтруют через 3-слойный марлевый стерильный фильтр.
После фильтрации исходного разведения с помощью стандартов мутности или камеры Горяева-

Тома определяют исходную концентрацию бактериальных клеток.
Готовят серию разведений с соблюдением мер стерильности следующим образом. От исходного

разведения отбирают 2,0 +/- 0,1 куб. см, помещают в стерильную пробирку и добавляют в нее 2,0 +/-

0,1 куб. см стерильного физраствора. Пробирку закрывают пробкой и содержимое перемешивают

встряхиванием в течение 3-х минут. Аналогичным образом готовят все остальные разведения до

конечной концентрации, равной 10 +/- 5 КОЕ/куб. см.
7.4. Построение градуировочного графика.
7.4.1. Определение фона (сигнала) от стерильного раствора. Передвигают крышку прибора ЛИК

до упора вперед, снимают крышку-дозатор, наливают в кювету из стекла 0,3 куб. см рабочего

реактива, устанавливают кювету с реактивом в реакционную камеру прибора и закрывают ее

крышкой-дозатором.
В полость крышки-дозатора наливают 0,1 куб. см стерильного физраствора, крышку прибора

передвигают до упора назад и нажимают на нее рукой.
С индикатора прибора снимают показания и записывают их в рабочий блокнот. Операцию

повторяют 3 раза, вычисляют среднее значение и записывают полученный результат в рабочий

журнал.
7.4.2. Анализ разведения бактериальной культуры.
Анализ приготовленного разведения бактериальной культуры начинают с разведения,

содержащего 10 +/- 5 КОЕ/куб. см, и проводят в той же последовательности, как указано в п. 7.4.1.
Внимание!!!
Реактив и разведения бактериальной культуры отбирать разными наконечниками дозатора

пипеточного во избежание загрязнения реактива.
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.
По окончании анализа разведения культуры из вычисленных средних значений показаний

прибора вычитают показания фона от физраствора и получают истинные значения

хемилюминесцентного анализа.
7.4.3. Построение градуировочного графика.
Градуировочный график строят на миллимитровой бумаге в координатах: величина

измеренного сигнала - концентрация клеток бактерий в анализируемом разведении. В последующем

график уточняют после поверки (ремонта) прибора или по усмотрению (желанию) специалиста-

микробиолога.
8. Определение общего микробного числа в пробах воды
8.1. Отбор проб воды.
8.1.1. Вода из сети централизованного водоснабжения отбирается во флаконы объемом 0,5 куб.

дм.
Для этого во флаконы вносят по 10 г серноватистокислого натрия и стерилизуют их

установленным образом. После стерилизации в них отбирают пробу хлорированной воды объемом

490 +/- 5 куб. см.
8.1.2. Вода из водоисточников децентрализованного водоснабжения.
Пробы воды отбирают в стерильные флаконы объемом 0,5 куб. дм батометром с соблюдением

мер стерильности.
8.2. Определение фона (сигнала) воды.
Флакон с пробой воды вскрывают, отбирают стерильной пипеткой 5 куб. см воды, фильтруют

ее через 2-слойный бумажный фильтр и определяют фон (сигнал), как указано в п. 7.4.1.
8.3. Определение числа клеток бактерий в анализируемой пробе в вегетативной форме.
Содержимое флакона тщательно перемешивают встряхиванием в течение 3-х минут и

анализируют на приборе, как указано в п. 7.4.1. Из полученной средней величины сигнала вычитают

величину фона воды, полученную по п. 8.2, и по градуировочному графику определяют искомую

концентрацию бактерий в воде.
8.4. Определение бактерий в воде в споровой форме.
8.4.1. Приготовление жидкой питательной среды.
На аналитических весах взвешивают 5 г пептона, 5 г натрия хлористого, 5 г глюкозы и

растворяют их в 1 куб. дм стерильной дистиллированной воды.
                                                             5
    Полученную    смесь стерилизуют при 112 °С   (0,49 х 10 Па)
12 минут.
8.4.2. Отобранную пробу воды тщательно перемешивают в течение 3 минут встряхиванием,
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.
отбирают от нее 8 +/- 0,1 куб. см в стерильную чистую пробирку, куда добавляют 2 +/- 0,1 куб. см

приготовленной жидкой питательной среды. Содержимое флакона тщательно перемешивают

встряхиванием в течение 1 минуты и помещают на 4 часа в термостат при температуре (37 +/- 0,5

°С).
8.4. По истечении 4 часов термостатирования пробы содержимое пробирки перемешивают

встряхиванием в течение 1 минуты и анализируют на приборе, как указано в п. 7.4.1. Из полученного

среднего значения показания прибора вычитают величину показания (сигнала), полученную по п.

8.3, и по градуировочному графику определяют концентрацию бактерий в споровой форме.
8.5. Общее содержание клеток мезофильных и мезотрофных бактерий в анализируемой пробе

будет равно сумме клеток, полученных по п. 8.3 и п. 8.4.
Экспресс-метод определения колифагов
хемилюминесцентным методом
Настоящие методические указания устанавливают методику определения колифагов в 100 куб.

см воды в системах централизованного и децентрализованного хозяйственно-питьевого

водоснабжения.
1. Принцип метода
Определение колифагов в воде основано на контроле изменения интенсивности

хемилюминесценции люминола в щелочной среде, инициируемой лизисными и нелизисными

клетками E.coli.
2. Чувствительность и сущность метода определения
Чувствительность метода составляет 2 КОЕ/куб. см. Сущность метода состоит в сравнении

изменения интенсивности хемилюминесценции люминола, инициируемой в щелочной среде

клетками E.coli, до и после контаминации их с колифагами в течение определенного времени.

Определению не мешают продукты метаболизма, отмершие клетки и питательная среда.
3. Средства измерений, вспомогательные устройства,
материалы и реактивы
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.
    3.1. Средства измерений
Хемилюминометр ЛИК                                  ТУ 000.000.АЖП
    3.2. Вспомогательные устройства
Дозатор пипеточный                                  ТУ 64-1-33-29
Батометр
Пробирки микробиологические
Термостат электрический с автоматическим
терморегулятором до 50 °С
Флакон объемом 150 куб. см
    3.3. Материалы
Бумага фильтровальная                               ГОСТ 12026
    3.4. Реактивы
Реактив на основе люминола
3% водный раствор перекиси водорода
Спирт этиловый ректификованный,
мясопептонный бульон                                ГОСТ 5962
4. Требования по безопасности
4.1. При работе с реактивами и этиловым спиртом соблюдаются правила безопасности по

ГОСТ 1.005.
4.2. При выполнении измерений с использованием прибора ЛИК соблюдают правила по ГОСТ

12.1.019 и инструкции по эксплуатации прибора.
5. Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений допускаются лица, имеющие квалификацию лаборант и опыт работы

на приборе ЛИК и прошедшие обучение в ФЦ ГСЭН МЗ РФ.
6. Условия измерения
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.
Измерения проводят при атмосферном давлении 730 - 760 мм рт. ст., температуре окружающей

среды (20 +/- 15) °С в лабораторных и полевых условиях.
7. Подготовка и выполнение определений
7.1. Прибор ЛИК готовят к работе в соответствии с инструкцией по эксплуатации.
7.2. Приготовление рабочего реактива.
В чистую пробирку дозатором пипеточным наливают 0,3 куб. см 3% водной перекиси водорода

и прибавляют к ней 6,0 +/- 0,1 куб. см реактива.
Рабочий реактив годен для анализа в течение 24 часов с момента его приготовления.
7.3. Подготовка проб к анализу.
    Отобранную для анализа пробу воды разливают в три стерильных
флакона по 100 куб. см в каждой и добавляют в них по 0,5 куб. см
                                  9
суспензии E.coli концентрации 10   (стандарт мутности 10 ед.),
1 куб. см     концентрированного      мясопептонного      бульона.
Содержимое перемешивают встряхиванием   в   течение   1   минуты
и закрывают крышками.
    Параллельно   в стерильный    флакон   наливают   100 куб. см
стерильной   дистиллированной    воды   (водопроводная   вода   не
используется!!!), добавляют в нее 0,5 куб. см   суспензии E.coli
                9
концентрацией 10 КОЕ/куб. см, 0,1 куб. см мясопептонного бульона
и содержимое   перемешивают встряхиванием в течение 1 минуты.
Флакон закрывают   крышкой и   его   содержимое используют для
контроля (контрольная проба).
8. Определение колифагов в пробе воды
Приготовленные контрольную пробу и пробы анализируемой воды поочередно анализируют на

приборе. Для этого крышку прибора передвигают до упора вперед, снимают крышку-дозатор, в
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.
кювету из стекла наливают 0,3 куб. см рабочего реактива и устанавливают его в реакционную камеру.
Камеру закрывают крышкой дозатором и в ее полость, сменив наконечник пипеточного

дозатора на чистый, наливают 0,1 куб. см смеси контрольной пробы. Передвигают крышку прибора

до упора назад, нажимают на нее рукой и снимают показания прибора. Анализ повторяют три раза,

вычисляют среднее значение и записывают в блокнот.
После анализа контрольную пробу и пробы анализируемой воды термостатируют в течение 2

час. 15 мин. при температуре 37 +/- 1 °С и проводят анализ проб в той же последовательности:

сначала контрольную пробу, а затем пробы анализируемой воды, вычисляют средние значения и

сравнивают их между собой. Если показания хотя бы одной из анализируемых проб воды больше

показаний контрольной пробы, то в анализируемой воде присутствуют колифаги.

1 2 3

Экспресс-метод определения микробиологических показателей качества питьевой воды, воды поверхностных и подземных источников

Похожие: